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        體外蛋白表達有這些特點值得你知道

        發布時間:2021-09-09      點擊次數:480
          蛋白表達就是重組DNA的一種實現技術,是用人為的方法將某一供體生物的遺傳物質-DNA大分子提取出來,之后在離體的條件下用適當的工具酶進行切割,再把它與載體的DNA分子連接起來,然后一起導入受體細胞中,從而使得外源物質在其中“安家落戶”,進行正常的復制和表達。利用重組蛋白表達技術,對蛋白質功能結構進行研究,給人類生產、生活帶來了極大的影響,在各個領域發揮了重要的作用。

          體外蛋白表達在大腸桿菌蛋白表達實驗中,經常會遇到蛋白表達不出來、表達出的蛋白沒有活性、蛋白表達過程中容易形成包涵體等情況,還要分析出現這些情況的原因:
          1、目的蛋白不適合在大腸桿菌中表達。包括稀有密碼子、mRNA結構、跨膜區等;
          2、表達條件需要進一步優化。比如溫度、分子伴侶、適合的表達宿主等;
          3、采用哪種溫和復性條件可以提高蛋白活性,減少包涵體的形成等等。

          體外蛋白表達系統的特點:
          是一種簡單快速的蛋白質體外表達系統?;虻霓D錄和翻譯基于大腸桿菌的內源TXTL機制,在體外建立高效的無細胞反應體系。同時,又保證了表達系統的兼容性。
          表達系統操作簡單,僅需將線性模板或質?;靹?,目標蛋白在數小時內即可表達出來。不需要轉化、克隆篩選和細胞裂解,避免了包涵體的形成。同時,避免了產物純化過程中目標蛋白的損失。
          蛋白表達系統一次實驗可對多個樣品進行操作,最小的反應體系是12 μl,表達出來的蛋白濃度能達到1μg/μL,反應體系可等比例擴大。反應系統里添加了多種大腸桿菌稀有密碼子,去除了密碼子偏好的問題,并且表達的蛋白可正常折疊。

        體外蛋白表達

         

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